Zadaniem nowo utworzonej instytucji miało być krzepienie tożsamości narodowej wśród serbskich mieszkańców Cesarstwa Austriackiego. Swoją pierwszą siedzibę Teatr miał w budynku miejskiego ratusza. Przedstawienia odgrywano tam przez 20 lat w okresie od 1872 do 1892. W tym roku ruszyły pracę nad budową nowego gmachu władz miejskich dla Nowego Sadu, w związku z czym Teatr ponownie pozostał bez swojej siedziby. W tym czasie prowadziła liczne występy goszcząc na scenach całej Wojwodiny. W 1895 roku teatr ponownie trafił do Nowego Sadu, w którym to zaczął odgrywać przedstawienia w nowym budynku w centrum miasta.
Po zakończeniu I wojny światowej Nowy Sad znalazł się w granicach Królestwa SHS. Teatr zaczął zatem funkcjonować w nowych warunkach politycznych. W styczniu 1928 roku w budynku teatralnym doszło do pożaru, który doprowadził do jego zawalenia. W związku z tym artyści ponownie znaleźli się w sytuacji, w której pozbawieni zostali swojej siedziby. Kolejnym ciosem dla Serbskiego Teatru Narodowego był wybuch II wojny światowej. W trakcie tego konfliktu śmierć poniosło 17 członków zespołu.