Kraków Zagłębie Sosnowiec Resovia GKS Jastrzębie ŁKS II Łódź Rekord Bielsko-Biała Olimpia Grudziądz Wisła Puławy Zagłębie II Lubin Skra Częstochowa Olimpia Elbląg
Zasady Uczestnictwo Udział w rozgrywkach Pucharu Polski 2025/2026 na szczeblu centralnym i regionalnym (wojewódzkich związków piłki nożnej) miały obowiązek wziąć drużyny występujące na sześciu najwyższych poziomach ligowych (od Ekstraklasy do klasy okręgowej), pozostałe zespoły mogły zgłosić się do Pucharu Polski na zasadzie dobrowolności. Drużyny, które zrezygnowały z udziału w rozgrywkach na szczeblu centralnym w sezonie 2025/2026, nie były uprawnione do udziału w rozgrywkach o Puchar Polski w dwóch kolejnych cyklach rozgrywek. Warunkiem gry na szczeblu centralnym turnieju było posiadanie licencji uprawniającej do udziału w rozgrywkach mistrzowskich w sezonie 2025/2026.
Losowanie w rundzie wstępnej zestaw pojedynków był ustalony odgórnie – rywalizowało osiemnaście drużyn II ligi 2024/2025 oraz dwie najsłabsze z I ligi 2024/2025 połączonych w pary według klucza:
17**-18*, 18**-17*, 1*-16*, 2*-15*, 3*-14*, 4*-13*, 5*-12*, 6*-11*, 7*-10*, 8*-9* (* miejsce w tabeli rozgrywek II ligi w sezonie 2024/2025, ** miejsce w tabeli rozgrywek I ligi w sezonie 2024/2025);