Do 31 grudnia 1942 roku załoga jednostki przechodziła szkolenie w składzie , operując z Kilonii.
Pierwszy rejs bojowy 5 grudnia 1942 roku U-225 wyszedł z Kilonii na swój pierwszy wojenny patrol, kierując się na Atlantyk. W dniach 22–31 grudnia U-Boot wchodził w skład wilczego stada „Spitz”. 27 grudnia o godzinie 21:35 U-225 wystrzelił torpedę w kierunku zbudowanego w 1928 roku brytyjskiego parowego zbiornikowca „Scottish Heather” o pojemności 7087 BRT, płynącego w konwoju z ładunkiem 750 ton paliwa dla jednostek eskorty na trasie Newcastle upon Tyne – Nowy Jork, z którego niedługo przedtem pobierała paliwo kanadyjska korweta typu Flower . Korweta zauważyła wynurzonego U-Boota przed atakiem i otworzyła w jego kierunku ogień, jednak okręt podwodny na pełnej prędkości wymanewrował ją i trafił statek w prawą burtę przed mostkiem na pozycji . Po ataku U-225 zanurzył się i został obrzucony przez HMCS „Chilliwack” bombami głębinowymi, jednak nie doznał żadnych uszkodzeń. Licząca 54 osoby załoga zbiornikowca najpierw opuściła statek w szalupach ratunkowych i obrała kurs na Irlandię, lecz drugi oficer i kilku marynarzy powrócili na pokład i zdołali ponownie uruchomić maszyny, po czym odnaleźli pozostałe łodzie z resztą załogantów.