Horatio Caine (David Caruso) – porucznik dowodzący sekcją CSI, specjalista od materiałów wybuchowych; Kyle Harmon (Evan Ellingson) – syn Horatio Caine’a; Julia Winston (Elizabeth Berkley) – była narzeczona Horatio i matka Kyle’a; Calleigh Duquesne (Emily Procter) – specjalistka od balistyki; Eric Delko (Adam Rodríguez) – ekspert z dziedziny daktyloskopii i narkotyków; Alexx Woods (Khandi Alexander) – koroner, odeszła z ekipy CSI (sezon 6, odcinek 19) z powodów rodzinnych; Tim Speedle (Rory Cochrane) – śledczy z ukończonym tytułem biologa. Ginie tragicznie w akcji w pierwszym odcinku trzeciego sezonu. Ryan Wolfe (Jonathan Togo) – były policjant drogówki, który dzięki swojej dokładności i doświadczeniu z dziedziny chemii zostaje dołączony do ekipy na miejsce Speedle’a na początku trzeciego sezonu. Pod koniec piątego sezonu zostaje wyrzucony z pracy za hazard, jednak wraca do CSI w środku sezonu szóstego (128 odcinek). Frank Tripp (Rex Linn) – detektyw wydziału zabójstw policji w Miami. Od czwartego sezonu na stałe współpracuje z ekipą. Natalia Boa Vista (Eva LaRue) – pojawiła się w serialu w 1 odcinku 4 sezonu jako analityk DNA, który pracuje nad nierozwiązanymi sprawami. Od sezonu piątego jest stałym członkiem ekipy. Yelina Salas (Sofia Milos) – detektyw wydziału zabójstw policji w Miami.