23 lipca 1503 urodziło się pierwsze dziecko pary – córka Anna Jagiellonka. Pomogło to rozluźnić napięte stosunki z cesarzem rzymskim Maksymilianem I, który zaoferował Władysławowi małżeństwo jego małej córeczki z którymś ze swoich wnuków (potem ustalono, że będzie nim Ferdynand I Habsburg).
1 lipca 1506 roku Anna urodziła syna – Ludwika II. Poród był przedwczesny, ale dziecko udało się uratować. Królowa zmarła niedługo potem – 26 lipca – w wyniku gorączki połogowej.
Genealogia Wśród przodków królowej byli m.in.: w 14. pokoleniu wstecz: Ryksa śląska, księżniczka polska i cesarzowa hiszpańska z dynastii Piastów w 11. pokoleniu: Andrzej II, król Węgier; w 11. pokoleniu: Baldwin V z Hainaut, hrabia Hainaut i Flandrii; w 10. pokoleniu: Edward I Plantagenet, król Anglii; w 9. pokoleniu: Floris IV, hrabia Holandii; w 7. pokoleniu: Filip III Śmiały, król Francji; w 7. pokoleniu: Ludwik de Bourbon, książę Burbonii, hrabia Clermont i La Marche; prapraprapradziadkowie (6. pokolenie wstecz) , 2. hrabia Suffolk, i (ok. 1376–1419) prapradziadek (4. pokolenie wstecz) Karol III Szlachetny, król Nawarry; prapradziadek (4. pokolenie wstecz) Ferdynand I Sprawiedliwy, król Aragonii, Sycylii i Sardynii i Korsyki.