Następnie związana była z prowadzeniem działalności gospodarczej.

Senator Stanów Zjednoczonych Gladys Pyle została pierwszą kobietą wybraną do Senatu Stanów Zjednoczonych bez uprzedniej nominacji na to stanowisko w listopadzie 1938. Jako kandydatka republikanów pokonała demokratę Herberta E. Hitchcocka, który został mianowany senatorem przez republikańskiego gubernatora Leslie Jensena po śmierci zasiadającego dotychczas na tym fotelu Petera Norbecka (również republikanina).

Kadencja Gladys Pyle w Senacie trwała niespełna dwa miesiące, potrzebne do dokończenia kadencji Norbecka (od 8 listopada 1938 do 3 stycznia 1939).

Pyle nie ubiegała się o ponowny wybór na pełne sześć lat. Jej następcą został jej kolega partyjny John Chandler Gurney.

Po zakończeniu senackiej kadencji W roku 1940 została pierwszą kobietą, która wygłosiła przemówienie na konwencji nominującej kandydata na prezydenta (republikańskim kandydatem został wtedy Wendell Willkie).

Była też członkinią South Dakota Board of Charities and Corrections (1943–1957) oraz przedstawicielką Northwestern Mutual Life Insurance Co.