Po poniesieniu znacznych strat w walkach z Indianami i wobec braków w zaopatrzeniu zmuszony był zawrócić.
Prawdopodobnie na początku roku 1538 Ayolas i wszyscy jego ludzie zginęli w starciu z Indianami w pobliżu dzisiejszego Asunción, gdzie wcześniej założył osadę Santa Maria de Asunción. Tam też dotarł ze spóźnioną odsieczą (czekał od roku 1537 u ujścia Pilcomayo) Martínez de Irala, ale nie zastał już nikogo przy życiu.
Wyprawa Juana de Ayolasa przyczyniła się do poznania biegu rzek tworzących estuarium Rio de la Plata i do postępującego osadnictwa hiszpańskiego w tym rejonie.
Jego imieniem nazwano port lotniczy Juan De Ayolas w miejscowości Ayolas.
Bibliografia I.P.Magidowicz, Historia poznania Ameryki Środkowej i Południowej, Warszawa 1979, Carl Waldman i Alan Wexler, Encyclopedia of Exploration, New York 2003,
Kategoria:Hiszpańscy podróżnicy i odkrywcy Kategoria:Zmarli w 1538 Kategoria:Postacie Mezoameryki