1 grudnia 1940 roku do budynku zostały przeniesione biura Opekty i Pectaconu, w których pracował ojciec Anne Frank, Otto.
Parter budynku składał się z trzech części: w części frontowej znajdowało się wejście dostawcze, w środkowej młynki do przypraw, a w tylnej, która była jednocześnie parterem aneksu, była pakowalnia przypraw. Na pierwszym piętrze znajdowały się biura. Miep Gies, Bep Voskuijl i Johannes Kleiman pracowali w biurze z przodu budynku, Victor Kugler w części środkowej, a Otto Frank w biurze na tyłach budynku, nad warsztatem i pod piętrami, w których ukrywał się z rodziną i znajomymi przez dwa lata.
Aneks, w którym Otto Frank urządził kryjówkę, znajduje się w tylnej części budynku. Był on ukryty przed oczyma przechodniów przez otaczające go z czterech stron domy. Właśnie takie położenie uczyniło z aneksu idealne miejsce na kryjówkę dla Ottona, jego żony Edith, córek Margot i Anne oraz ich czwórki przyjaciół: Hermanna van Pelsa, jego żony Augusty, ich syna Petera oraz znajomego dentysty Fritza Pfeffera. Całkowita powierzchnia kryjówki wynosiła około 46 m². Anne wspomina w swoim dzienniku, że ich kryjówka była o wiele lepsza od innych, o których słyszała. Cała ósemka pozostała w ukryciu przez ponad 2 lata aż do anonimowego ujawnienia ich miejsca pobytu władzom hitlerowskim.