W 1823 roku ukończył tę szkołę i zdobył stopień bakalaureata, tym samym stając się pierwszym Afroamerykaninem w historii, który otrzymał dyplom amerykańskiej uczelni.
Późniejsze lata Twilight pracował jako nauczyciel w mieście Peru w stanie Nowy Jork, a następnie był duchownym Kościoła Prezbiteriańskiego i służył w kilku kongregacjach. W 1829 roku został dyrektorem szkoły średniej w Brownington. W latach 1834–1836 za zebrane przez siebie pieniądze i według własnego projektu wybudował czteropiętrowy budynek mieszczący nową szkołę i internat, który nazwał „Athenian Hall”. W 1836 roku Alexander Twilight został wybrany do stanowej Izby Reprezentantów, stając się pierwszym w historii afroamerykańskim prawodawcą.
W 1847 roku przestał kierować szkołą w Brownington. Od tej pory pracował jako nauczyciel w Shipton i Hatley w Prowincji Kanady. Po kilku latach Twilight powrócił do Brownington i wznowił pracę na stanowisku dyrektora szkoły i pastora. W 1853 roku zrezygnował z funkcji pastora, a dwa lata później z funkcji dyrektora.