Puchar Drugiej Ligi Ukrainy 2000/2001 - II rozgrywki ukraińskiej PFL spośród drużyn Drugiej Lihi, mające na celu wyłonienie zdobywcy Pucharu Drugiej Ligi oraz półfinalistów, którzy kwalifikują się tym samym do Pucharu Ukrainy sezonu 2000/01. Sezon trwał od 29 lipca 2000 do 9 maja 2001.
W sezonie 2000/2001 rozgrywki te składały się z: meczów rundy wstępnej (1/32 finału), meczów 1/16 finału, meczów 1/8 finału, meczów 1/4 finału, meczów 1/2 finału, meczu finałowego.
Drużyny Do rozgrywek Pucharu przystąpiło 44 kluby Drugiej Lihi. Kluby Drugiej Lihi: Adoms Krzemieńczuk Arsenał Charków Awanhard Roweńky Cementnyk-Chorda Mikołajów Czornomoreć-2 Odessa Desna Czernihów Dnipro-3 Dniepropetrowsk Dynamo Lwów Dynamo-3 Kijów Enerhetyk Bursztyn FK Czerkasy-2 FK Kałusz FK Krasiłów Frunzeneć-Liha-99 Sumy Hałyczyna Drohobycz Hazowyk Komarno Hirnyk-Sport Komsomolsk Karpaty-2 Lwów Krywbas-2 Krzywy Róg Maszynobudiwnyk Drużkiwka Metalist-2 Charków Metałurh-2 Mariupol Metałurh-2 Zaporoże Naftowyk Dolina Obołoń-PPO-2 Kijów Olimpija FK AES Jużnoukraińsk Ołkom Melitopol Oskił Kupiańsk Polissia Żytomierz Portowyk Iljiczewsk Prykarpattia-2 Iwano-Frankowsk Rihonda Biała Cerkiew SK Chersoń Sokił Złoczów Stal-2 Ałczewsk Systema-Boreks Borodzianka Szachtar-3 Donieck Techno-Centr Rohatyn Ternopil-Nywa-2 Tarnopol