(Drużyny zakwalifikowane to pięć najlepszych drużyn z każdej z czterech grup (z wykluczeniem rezerw) i cztery z największą liczbą punktów z pozostałych drużyn): Real Unión Cultural Leonesa SD Ponferradina Zamora Lemona FC Cartagena Lorca Deportiva AD Alcorcón CD Leganés Mérida CD Alcoyano UE Sant Andreu CE Sabadell Ontinyent CF Gramenet Cádiz CF Real Jaén Poli Ejido Marbella Puertollano Atlético Ciudad* Conquense* Ceuta* Melilla*
18 drużyn z rozgrywek Tercera División w sezonie 2008/2009. (Zwycięzcy z każdej z 18 grup (bez rezerw)): Compostela Real Oviedo Gimnástica Lagun Onak Reus Deportiu Villajoyosa CF Alcalá Palencia Unión Estepona San Roque Sporting Mahonés Tenisca Caravaca Cerro Reyes Izarra Logroñés Monzón CD Toledo
Pierwsza runda Mecze rozegrano 22, 25, 26 i 27 sierpnia 2009.
AD Alcorcón, CD Alcoyano, Atlético Ciudad, Mérida, Ontinyent CF i Poli Ejido awansowały bez rozgrywania meczów.
Druga Runda Mecze rozegrano 1, 2, 3, 9 i 16 września 2009.
Recreativo Huelva awansowało bez rozgrywania meczu.
Trzecia Runda Mecze rozegrano 7 października 2009.
Real Murcia awansował bez rozgrywania meczu.
1/16 Finału Pierwsze mecze rozegrano 27, 28 i 29 października, a rewanże 10, 11 i 12 listopada 2009.