Kolekcja Kolekcja muzeum początkowo opierała się na zbiorach margrabiów Badenii. Została znacząco poszerzona przez księżniczkę heską Karolinę, żonę margrabiego Karola Fryderyka Badeńskiego. W latach 1899-1920 dyrektorem muzeum był Hans Thoma, który zrezygnował w wieku 81 lat. W 1942 zbiory zostały wywiezione z budynku i dzięki temu nie ucierpiały podczas nalotu 27 września 1944. Ponowne otwarcie muzeum odbyło się dopiero w 1951. W zabytkowym, budynku są eksponowane dzieła powstałe między XIV a XIX wiekiem. Prace z XX wieku są prezentowane w sąsiednim budynku, dawnej oranżerii.
Wśród malarzy wystawianych w muzeum są m.in. Matthias Grünewald (w tym ołtarz z Tauberbischofsheim), Albrecht Dürer, Hans Baldung, Lucas Cranach Starszy, Hans Burgkmair, Rembrandt, Pieter de Hooch, Peter Paul Rubens, David Teniers (młodszy), Hyacinthe Rigaud, Claude Lorrain, Nicolas Poussin, Jean-Baptiste-Siméon Chardin, Eugène Delacroix, Gustave Courbet, Édouard Manet, Camille Pissarro, Claude Monet, Edgar Degas, Auguste Renoir, Paul Cézanne, Paul Gauguin, Caspar David Friedrich, Hans Thoma, Lovis Corinth, August Macke, Ernst Ludwig Kirchner, Erich