W Drugiej lidze w grupie Istok w sezonie 2000/01 występowało 18 drużyn. Drużyna Miasto Sezon 1999/00 Uwagi Drużyna, która spadła z Prvej ligi SR Јugoslavije 1999/00: FK Hajduk Belgrad Belgrad-Zvezdara 18. miejsce Drużyny, które występowały w Drugiej lidze Istok SR Јugoslavije 1999/00: FK Jedinstvo Paraćin Paraćin 4. miejsce OFK Niš Nisz 5. miejsce FK Radnički Svilajnac Svilajnac 6. miejsce FK Trajal Kruševac Kruševac 7. miejsce FK Mladi Radnik Požarevac Požarevac 10. miejsce FK Dubočica Leskovac Leskovac 11. miejsce FK Temnić Varvarin Varvarin 12. miejsce FK Bor Bor 13. miejsce FK Vučje Vučje 14. miejsce FK Rudar Kostolac Kostolac 15. miejsce FK Rudar Aleksinački Rudnik Aleksinački Rudnik 16. miejsce Drużyny, które występowały w Drugiej lidze Sjever SR Јugoslavije 1999/00: FK Beograd Belgrad-Palilula 1. miejsce * zrezygnował z awansu do Prvej ligi FK Zvezdara Belgrad Belgrad-Zvezdara 4. miejsce FK BSK Borča Belgrad-Palilula 7. miejsce Drużyny, które awansowały z Srpskiej ligi 1999/00: FK Železničar Niš Nisz 1. miejsce Srpska liga – Nis FK Napredak Kušiljevo Kušiljevo 2. miejsce Srpska liga – Timok ** zajął miejsce FK Rudar Bor FK Žitorađa Žitorađa 2.