Disksovski velikopridruženi protein 5 (DAP-5), znan i kao diskovski veliki homolog 7 (DLG7) ili hepatomski nadregulirani protein (HURP), je protein koji je kod ljudi kodiran genom DLGAP5.
Pomoći PCR analize hibridnog panela ćelija čovjek-glodar, Nomura et al. (1994) locirali su gen DLGAP5 na hromosomu 14.Nomura, N., Miyajima, N., Sazuka, T., Tanaka, A., Kawarabayasi, Y., Sato, S., Nagase, T., Seki, N., Ishikawa, K., Tabata, S. Prediction of the coding sequences of unidentified human genes. I. The coding sequences of 40 new genes (KIAA0001-KIAA0040) deduced by analysis of randomly samples cDNA clones from human immature myeloid cell line KG-1. DNA Res. 1: 27-35, 1994. Note: Erratum: DNA Res. 2: 210 only, 1995. PubMed: 7584026 Primjenom fluorescentne hibridizacije in situ, Bassal et al. (2001) precirirali su mapiranje gena DLGAP5 na hromosomskoj poziciji 14q22.2-q23.2.Bassal, S., Nomura, N., Venter, D., Brand, K., McKay, M. J., van der Spek, P. J. Characterization of a novel human cell-cycle-regulated homologue of Drosophila dlg1. Genomics 77: 5-7, 2001. PubMed: 11543626 I Hartz (2018) mapirala je gen DLGAP5 na hromosomskoj lokaciji 14q22.3, na osnovu poravnavanja sekvence DLGAP5 (GenBank D13633) sa genomskom sekvencom (GRCh38).Hartz, P. A. Personal Communication. Baltimore, Md. 1/31/2018.
Tsou et al (2003) utvrdili su da gen DLGAP5 ima 19 egzona i da se proteže približno na 43,3 kb. Egzon 1 je nekodirajući.Tsou, A.-P., Yang, C.-W., Huang, C.-Y. F., Yu, R. C.-T., Lee, Y.-C. G., Chang, C.-W., chen, B.-R., Chung, Y.-F., Fann, M.-J., Chi, C.-W., Chiu, J.-H., Chou, C.-K. Identification of a novel cell cycle regulated gene, HURP, overexpressed in human hepatocellular carcinoma. Oncogene 22: 298-307, 2003. PubMed: 12527899 DLG7 je kinetohorni protein koji stabilizira mikrotubule u blizini hromosoma. DLG7 kontrolira dinamiku vretenskog aparatae, pospješujući interkinetohornu napetost i efikasno hvatanje kinetohora. DGL7 je dio Ran-ovisnog kompleksa. Stabilizacija DGL7 u ćeliji nastaje uslijed fosforilacije aurora A-kinaza. Ekspresija DGL7 nađena je u karcinomu i matičnim ćelijama.
Aminokiselinska sekvenca
Dužina polipeptidnog lanca je 846 aminokiselina, a molekulska težina 95.115 Da.
1020304050 MSSSHFASRHRKDISTEMIRTKIAHRKSLSQKENRHKEYERNRHFGLKDV NIPTLEGRILVELDETSQGLVPEKTNVKPRAMKTILGDQRKQMLQKYKEE KQLQKLKEQREKAKRGIFKVGRYRPDMPCFLLSNQNAVKAEPKKAIPSSV RITRSKAKDQMEQTKIDNESDVRAIRPGPRQTSEKKVSDKEKKVVQPVMP TSLRMTRSATQAAKQVPRTVSSTTARKPVTRAANENEPEGKVPSKGRPAK NVETKPDKGISCKVDSEENTLNSQTNATSGMNPDGVLSKMENLPEINTAK IKGKNSFAPKDFMFQPLDGLKTYQVTPMTPRSANAFLTPSYTWTPLKTEV DESQATKEILAQKCKTYSTKTIQQDSNKLPCPLGPLTVWHEEHVLNKNEA TTKNLNGLPIKEVPSLERNEGRIAQPHHGVPYFRNILQSETEKLTSHCFE WDRKLELDIPDDAKDLIRTAVGQTRLLMKERFKQFEGLVDDCEYKRGIKE TTCTDLDGFWDMVSFQIEDVIHKFNNLIKLEESGWQVNNNMNHNMNKNVF RKKVVSGIASKPKQDDAGRIAARNRLAAIKNAMRERIRQEECAETAVSVI PKEVDKIVFDAGFFRVESPVKLFSGLSVSSEGPSQRLGTPKSVNKAVSQS RNEMGIPQQTTSPENAGPQNTKSEHVKKTLFLSIPESRSSIEDAQCPGLP DLIEENHVVNKTDLKVDCLSSERMSLPLLAGGVADDINTNKKEGISDVVE GMELNSSITSQDVLMSSPEKNTASQNSILEEGETKISQSELFDNKSLTTE CHLLDSPGLNCSNPFTQLERRHQEHARHISFGGNLITFSPLQPGEF
Simboli
C: Cistein D: Asparaginska kiselina E: Glutaminska kiselina F: Fenilalanin G: Glicin H: Histidin I: Izoleucin K: Lizin L: Leucin M: Metionin N: Asparagin P: Prolin Q: Glutamin R: Arginin S: Serin T: Treonin V: Valin W: Triptofan Y: Tirozin
Kloniranje i ekspresija DLGAP5 je protein povezan s mitotskim mikrotubulama koji pojačava njihov u polimerizaciju i promovira pravovremeno stvaranje i stabilnost bipolarnog vretena .
Sekvenciranjem klonova dobijenih iz frakcionirane veličine nezrelih mijeloidnih ćelijskih linija KG-1, Nomura et al. (1994) klonirali DLGAP5, koji su označili KIAA0008. Izvedeni protein sadrži 805 aminokiselina. Northern blot analiza otkrila je visoku ekspresiju KIAA0008 u timusu, sjemenicima i debelom crijevu, te umjerenu ekspresiju u placenti, bubrezima, jajnicima i tankom crijevu. Ekspresija je bila niska u leukocitima periferne krvi, a nije je bilo u srcu, mozgu, plućima, jetri, skeletnim mišićima, gušterači i prostati. Ekspresija KIAA0008 bila je visoka u KG-1 i u HeLa ćelijama. Koristeći Northern blot analizu, Bassal et al. (2001) otkrili su visoku ekspresiju KIAA0008 u timusu, sjemenicima i debelom crijevu. U HeLa ćelijama, ekspresija KIAA0008 inducirana je tokom S faze ćelijskog ciklusa i održavana je tokom G2 i M-faze.
Tsou et al. (2003) klonirali su DLGAP5, koji su nazvali HURP, iz humane Hep3B cDNA biblioteke hepatoma. Izvedeni protein od 846 aminokiselina ima navodni nuklearni eksportni signal bogat leucinom, dvije kutije za uništavanje, KEN-kutiju i domen sa upredenom zavojnicom. Također ima približno 100-aminokiselinski gvanilat-kinaze-pridruženi protein (GKAP, ili DLGAP1; 605445) domen homologije-1. HURP dijeli 61% aminokiselinskog identiteta s utvrđenim proteinom miša Hurp od 808 aminokiselina. Kvantitativna RT-PCR analiza ljudskih tkiva otkrila je obilnu ekspresiju HURP-a u fetusnoj jetri, pa koštanom srži, sjemenicima, debelom crijevu i placenti. Ekspresija HURP-a bila je niska na tranziciji G1/S u sinhroniziranim HeLa ćelijama, porasla je kroz S fazu i G2/M, a vrhunac je dosegla u vrijeme kada su ćelije izašle iz mitoza. Imunofluorescentnom analizom otkriven je endogeni HURP HeLa ćelija u citoplazmi i jedru, tokom interfaze, ali je lokaliziran na vretenasta vlakna u mitotskim ćelijama.
Funkcija gena Tsou et al. (2003) otkrili su da je ekspresija Hurpa indukovana tokom regeneracije mišje jetre nakon parcijalne hepatektomije. Prekomerna ekspresija HURP-a u 293T ćelijama promovirala je preživljavanje ćelija u niskom serumskom i povišenom ćelijskom potencijalu za rast, neovisan o sidrištu.
Koristeći genomski zaslon, Wong i Fang (2006) identificirali su HURP kao mitotski regulator. U poređenju sa kontrolama, vretenske mikrotubule bez HURP-a bile su manje stabilne, sporije polimerizirane i pokazivale veće stope prometa. HURP-osiromašene ćelije imale su nevezane kinetohore na neporavnatim hromosomima i kinetohore pod djelomičnom napetošću na poravnatim. Loše poravnanje hromozoma duž metafazne ploče u ćelijama osiromašenim HURP-om rezultiralo je aktivacijom vretena i odloženim početkom anafaze; međutim, zadržavanje kontrolne tačke nije održano i ćelije su pokrenule anafazu u prisustvu djelimične napetosti kinetohora i neporavnatih hromosoma. Prekomjerna ekspresija HURP-a u HeLa ćelijama rezultirala je hiperstabilizacijom mitotskog vretena i smanjenom napetošću na sestrinskim kinetohorima.Wong, J., Fang, G. HURP controls spindle dynamics to promote proper interkinetochore tension and efficient kinetochore capture. J. Cell Biol. 173: 879-891, 2006. PubMed: 16769820
Reference
Dopunska literatura
Vanjski linkovi
Kategorija:Geni na hromosomu 14 Kategorija:Ljudski proteini Kategorija:Proteomika