vpravo|náhled|300px|Plicní tkáň pacienta s emphysemou barveno hematoxylinem a eosinem.

Barvení je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii na prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů, které zlepšuje nebo umožňuje jejich pozorování optickým mikroskopem.

Užívaná barviva abecedně: bismarckova hněď karmín – barví jádra červeně, extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti), nepřebarvuje, dříve využíván v embryologických studiích pro barvení celých bloků tkání. Coomassie DAPI eosin Erie garnet = direct red 10 etidium bromid fenolová červeň hematoxylin Hoechstovo barvivo jód jádrová červeň „Kerlechtrot“ – barví jádra červeně, v roztoku síranu hlinitého Kongo červeň = Congo red = direct red 28 – barví amyloid červeně krystalová violeť kyselina pikrová (2,4,6-trinitrofenol) – barví cytoplazmu buněk a svaly žlutě kyselý fuchsin – kolagenní vlákna červeně Luciferová žluť – fluorescenční barvivo malachitová zeleň methylová zeleň methylová modř neutrální červeň nilská modř nilská červeň = Nile blue oxazone – barví tukové kapénky červeně olejová červeň = oil red O – barví tuk červeně rhodamin safranin saturnová červeň (sirius red F3B, direct red 80, F3B 200, C. I. No. 35780, CAS No. 2610-10-8) – azobarvivo, kolagenní vlákna barví červeně, případně barvení amyloidu irius red 4B = direct red 79 = L4B 200 – azobarvivo šafrán – barví kolagen, extrakt z blizen šafránu setého Weigertův železitý hematoxylin = Weigert's Iron Hematoxylin – barví chromatin v jádrech šedě nebo temně hnědě (modročerně až hnědočerně)

Barvicí metody Existuje mnoho detailně rozpracovaných barvících metod, z nejvýznamnějších je možné uvést:

Barvení mukopolysacharidů Mukopolysacharidy se barví směsí PAS, alciánové modři a hematoxylinu, a to tímto postupem:

odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilce kyselina jodistá 0,5 % 5 minut praní vodou 2–3 min, oplach destilovanou vodou Schiffovo reagens 20–30 min tekoucí voda 10 min., oplach destilovanou vodou alciánová modř (před použitím se doporučuje přefiltrovat) 1-2 hod. oplach vodou hematoxylin 5 min. praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3 (5 min.), xylen 4 (5 min.), montování

Výsledek: neutrální mukopolysacharidy a glykogen – červeně kyselé mukopolysacharidy – modrozeleně jádra – modře hematoxylinem

Barvení kolagenních vláken Kolagenní vlákna je možné barvit za použití saturnové červeni a Weigertova železitého hematoxylinu:

odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.) důkladně proprat ve vodě Weigertův železitý hematoxylin (roztok A + roztok B 1 : 1) 5 min. nebo gallocyanin 24 hod. praní v tekoucí vodě 5–10 min. saturnová červeň 1–20 min. (10 ml 1 % roztoku saturnové červeně + 90 ml nasyceného roztoku kys. pikrové) několikrát oplach v absolutním alkoholu, xylen 3, xylen 4, montování

Výsledek: kolagenní vlákna – červeně svalovina – žlutě (pouze pokud je v saturnové červeni také kyselina pikrová) jádra – hematoxylinem

Barvení elastických vláken (orcein + hematoxylin)

odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilované vodě orcein 6-8 hod. při teplotě 38-40 °C oplach destilovanou vodou oplach kyselým alkoholem 70 % praní ve vodě hematoxylin 5 min. praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3, xylen 4, montování

Výsledek: elastická vlákna – červenohnědě (elastické vazivo (žluté vazy obratlů, vazy hrtanu), elastická chrupavka (ušní boltec, epiglottis))

Giemsovo barvení

Gramovo barvení

Základní barvící metoda v mikrobiologii. Barvíme fixovaný preparát.

krystalová violeť na 20s – oplach ve vodě Lugolův roztok na 20s – oplach ve vodě aceton – odbarvení (dokud odtéká barva z preparátu) Karbolfuchsin na 20s – oplach ve vodě.

Externí odkazy

Metody: Metody histologického studia (PDF dokument) Odběr materiálu pro histologické vyšetření (textový dokument DOC) Barviva: přehled barviv (anglicky)

Kategorie:Barvicí metody