Kompenzace fluorescence je matematická korekce přesvitu emisního spektra fluoroforu do jiného kanálu Roederer, Mario. "Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats." Cytometry 45.3 (2001): 194-205. Bagwell, C. Bruce, and Earl G. Adams. "Fluorescence spectral overlap compensation for any number of flow cytometry parameters." Annals of the New York Academy of Sciences 677.1 (1993): 167-184. náhled Světlo fluorochromu vyzářené po excitaci příslušným laserem prochází optickým filtrem na detektor. Pokud je více fluorochromů excitováno stejným laserem, dochází pak k přesvitu. Poprvé kompenzaci dat z průtokového cytometru provedl v roce 1977 Michael Loken et al. na dvoubarevném experimentu, kdy byly myší splenocyty barveny fluoresceinem a rhodaminem.Loken, Michael R., David R. Parks, and Leonard A. Herzenberg. "Two-color immunofluorescence using a fluorescence-activated cell sorter." Journal of Histochemistry & Cytochemistry 25.7 (1977): 899-907.
Při vícebarevných experimentech, kdy se emisní spektra některých z fluorochromů překrývají a jsou tedy měřena více detektory, je kompenzace nezbytná.Roederer, Mario. "Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats." Cytometry 45.3 (2001): 194-205. Kompenzace se provádí pomocí analyzačních softwarů pro cytometrická data jako je FlowJo http://www.flowjo.com/, FlowLogichttp://www.inivai.com/flowlogic/, Kaluza https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/wsrportal.portal;jsessionid=p4GyWD3FmyYSq4c5TkyTHm2DBVvvJCrlsjnRspxpHrLRpvmPndGc!-1628535361!-1671786268?_nfpb=true&_windowLabel=UCM_RENDERER&_urlType=render&wlpUCM_RENDERER_path=%2Fwsr%2Fcountry-selector%2Findex.htm&_WRpath=%252Fwsr%252Fresearch-and-discovery%252Fproducts-and-services%252Fflow-cytometry%252Fsoftware%252Fkaluza-analysis-software%252Findex.htm&intBp=truea další.
Důležité jsou kompenzační kontroly – vzorky obarvené pouze jedním fluorochromem. Mohou jimi být buňky nebo se používají kompenzační kuličky. Dále jsou používány kontroly FMO (fluorescence minus one) které slouží ke správnému gatování populací. Herzenberg, Leonore A., et al. "Interpreting flow cytometry data: a guide for the perplexed." Nature immunology 7.7 (2006): 681-685.
Reference
Kategorie:Fluorescence Kategorie:Mikroskopie Kategorie:Průtoková cytometrie