Le transfert (en anglais blot) est une technique de biologie moléculaire et en biochimie qui permet de rechercher la présence d'une molécule déterminée (ADN , ARN, protéine, etc.) dans un échantillon biologique (extrait cellulaire, fluide biologique, fraction purifiée...). Le transfert consiste à transférer les molécules à analyser sur un support solide (par exemple, une membrane de nitrocellulose ou de nylon), éventuellement après une étape de séparation comme une électrophorèse sur gel, puis à utiliser une sonde spécifique (fragment d'ADN ou d'ARN, anticorps, etc.) de la cible recherchéeL'utilisation de sondes spécifiques directement dans un gel d’électrophorèse n'est pas possible pour des raisons techniques. Il en existe plusieurs variantes en fonction des molécules analysées et des méthodes de détection utilisées.

Ces techniques, dont les premiers développements remontent au milieu des années 70, restent régulièrement utilisées en recherche ou en clinique.

Historique La première technique de transfert de molécules fut développée en 1976 par Edwin Southern. L'ADN génomique était dénaturé et découpé puis les fragments obtenus était séparés par électrophorèse. Après transfert sur une membrane, la détection était réalisée par des sondes d'ADN radioactives.

Cette technique fut ensuite adaptée pour d'autres types de molécules : l'ARN et les protéines puis, plus récemment, pour les lipides ou pour l'analyse des interactions inter-moléculaires.

Les principales techniques de transfert et d'analyse d’interactions sont listées dans le tableau suivant.

Technique Nom Molécules Invention Transfert Southern blot ADN 1975, Southern Northern blot ARN 1975, Awine et al. Western blot Protéines 1979, Towbin et 1981, Burnette Analyse des interactions Southwestern blot ADN-protéines 1980, Bowen et al. Electrophoretic mobility shift assay ADN-protéines 1981, Garner & Revzin et 1981, Fried & Crothers Northwestern blot ARN-protéines 1984, Adams et al. Far-western blot Protéines-protéines 1994, Hummler et al.

Actuellement, d'autres techniques d'analyse commencent à remplacer certaines techniques de transfert. Par exemple, la PCR (1983) et les puces à ADN pour l'analyse de l'ADN et de l'ARN.

Terminologie Le transfert d'ADN est appelé en anglais Southern blot, en hommage à son inventeur. Les autres techniques sont appelées northern blot pour l'ARN, western blot pour les protéines et far-eastern blot pour les lipides (en référence, de façon humoristique, aux 4 points cardinaux : north, south, east et west en anglais). Seul le mot Southern provient d'un nom propre et prend une majuscule.

En français, il est recommandéRecommandations pédagogique (Ressources nationales de chimie du Ministère de l'éducation et de la recherche).Vocabulaire de génétique (Journal officiel du 23 novembre 2006).Le grand dictionnaire terminologique (Office québécois de la langue française). d'utiliser, par exemple pour les protéines, les termes transfert de protéines ou transfert de western. Le nom anglais des techniques est très souvent utilisé dans la littérature ou dans les laboratoires.

Le terme buvardage est parfois rencontré pour traduire (en référence à la traduction littérale de blot signifiant tâche ou sécher, passer un buvard sur.).

Principe

Ces techniques se déroulent en général en 3 ou 4 étapes (la première étape, la séparation, étant optionnelle). La séparation des molécules à analyser, en général par une électrophorèse. Le transfert proprement-dit des molécules depuis le gel sur une membrane. L'hybridation avec une ou plusieurs (multiplexe) sondes marquées. La détection des sondes.

Notes et références

Voir aussi Dot blot, similaire aux transferts d'ADN, d'ARN ou des protéines mais sans la première étape de séparation

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