Le est une technique de biologie moléculaire par transfert de molécules développée par T. Taki en 1994 pour analyser les lipides puis adaptée à d'autres molécules (métabolites, hormones, médicaments, etc.)
Principe
Cette technique se déroule en 3 étapes : la séparation des molécules à analyser, le transfert sur une membrane de PVDF puis la détection de ces molécules. Contrairement aux autres techniques de transfert qui utilisent préférentiellement l'électrophorèse comme méthode de séparation, le far-eastern blot utilise la chromatographie sur couche mince haute-performance, compatible avec les molécules hydrophobes ou non-ioniques. Après le transfert sur une membrane, plusieurs méthodes de détection peuvent être utilisées : des tests de liaison de ligands : on incube la membrane avec molécules marquées susceptibles d'interagir avec les molécules à analyser. On peut étudier ainsi l'interaction des lipides d'une membrane cellulaire avec différents types de ligands (anticorps, lectines, bactéries, virus, toxines, etc.) ou l'action d'enzymes sur une membrane cellulaire. l'identification directe par spectrométrie de masseTaki T., Ishikawa D., Handa S. and Kasama T.Direct Mass Spectrometric Analysis of Glycosphingolipid Transferred to a Polyvinylidene Difluoride Membrane by Thin-Layer Chromatography BlottingAnalytical Biochemistry Volume 225, Issue 1, February 1995, Pages 24-27 , qui peut apporter des informations sur la structure des molécules à analyser.
Il est également possible d'utiliser cette technique sans séparation (technique du dot blot).
Notes et références
Catégorie:Technique de biologie moléculaire