La polynucléotide-kinase, ou polynucléotide-5'-hydroxyl-kinase, est une enzyme utilisée en biologie moléculaire pour transférer un groupement phosphate γ provenant d'une molécule ATP sur l'extrémité 5'-OH d'une molécule polynucléotidique.

Cette réaction peut être utilisée pour marquer radioactivement une molécule d'ADN.

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