A coloração de Romanowsky é uma técnica de coloração protótipo que foi a precursora de vários métodos distintos mas similares, incluindo a coloração de Giemsa, a coloração de Jenner, a de Wright, a de Field e a de Leishman, que são usadas para diferenciar as células em amostras patológicas. Foi nomeado em homenagem ao médico russo Dmitri Leonidovich Romanowsky (1861-1921), que a inventou em 1875.R. W. Fairbrother, Geoffrey A. Taylor; A Text-Book of Bacteriology; Butterworth-Heinemann, 2014. pg 476Harsh Mohan; Pathology Practical Book; JP Medical Ltd, 2012. pg 202Horobin RW; How Romanowsky stains work and why they remain valuable - including a proposed universal Romanowsky staining mechanism and a rational troubleshooting scheme. Biotech Histochem. 2011 Feb;86(1):36-51. doi: 10.3109/10520295.2010.515491.Bhupesh Bagulkar, Minal Chaudhary; Romanowsky Stains: Handbook on Romanowsky Stain Family for Hematology; LAP Lambert Academic Publishing, 2012.Gary W. Gill; Cytopreparation - Chapter Romanowsky Stains; Volume 12 of the series Essentials in Cytopathology pp 217-225, 2012.Paulo Henrique da Silva, Hemerson Bertassoni Alves, Samuel Ricardo Comar, Railson Henneberg, Júlio Cezar Merlin, Sérvio Túlio Stinghen; Hematologia Laboratorial: Teoria e Procedimentos; Artmed Editora, 2015.
É uma técnica de coloração que encontra aplicação no diagnóstico em linfonodos.Paolo Gattuso, Vijaya B. Reddy, Shahla Masood; Differential Diagnosis in Cytopathology Book and Online Bundle; Cambridge University Press, 2014. pg 400Marcio Antônio Batistela Moreira, et al; Aplicação da técnica de imunofluorescência direta para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em aspirado de linfonodo ; Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science.
Exame microscópico de esfregaços de sangue corados
right|thumb|200x200px|Película de sangue fina corada por Giemsa que mostra infecções por Plasmodium falciparum
Paul Ehrlich tinha usado misturas de corantes ácidos e básicos para esta finalidade em 1879, por exemplo: fucsina (corante ácido) e azul de metileno (corante básico). Em 1891, RomanowskyРомановскiй Д.Л. (1890). "Къ вопросу о строенiи чужеядныхъ малярiи". Врачъ 52: 1171–1173Романовскiй Д.Л. Къ вопросу о паразитологiи и терапiи болотной лихорадки. Диссертацiя на степень доктора медицины. Спб. 1891 г., 118 с. desenvolveu técnicas utilizando uma mistura de eosina Y e azul de metileno modificado que produziu um matiz surpreendente não atribuível a qualquer componente de coloração: uma bela sombra característica de roxo. Na solução envelhecida (após dias do preparo do corante), o azul de metileno se oxida em gradações diferentes, originando os azures de metileno. Os requisito para a ocorrência do efeito de Romanowsky-Giemsa são: Um corante catiônico: o melhor corante é Azure B e, embora Azure A dê a cor roxa nuclear, o azul citoplasmático é inferior. Nenhum outro corante catiónico, tal como o azul de metileno é adequado. Um corante aniônico: Mais comumente a eosina Y é usada.
Uma vez que as soluções aquosas de corante são instáveis, o metanol foi introduzido como um solvente, e William Boog Leishman e James Homer Wright defenderam seu uso como um fixador antes da coloração. Gustav Giemsa melhorou esta técnica, padronizando as soluções corantes e adicionando glicerol para aumentar a estabilidade.
A desmetilação de azul de metileno em solução aquosa, utilizando calor e alcalino produz uma mistura de Azure A, Azure B, violeta de metileno, e azul de metileno. Eosina Y é então adicionada para produzir um corante de "ponto morto". O precipitado é então dissolvido numa mistura de metanol e glicerol, para formar uma solução de reserva; esta é diluída com água ou um tampão aquoso para formar uma solução 'de trabalho' que é utilizada na coloração de espécimes de patologia. A solução 'trabalho' é estável durante 3 horas.
Procedimentos de captura imunocromatográficos (testes rápidos de diagnóstico, tais como os testes de detecção de antígeno da malária) são opções de diagnóstico não-microscópicas para o laboratório que podem não ter experiência microscopia apropriado disponível.
Colorações características obtidas
Diferentes componentes celulares e as colorações características obtidas com corante de Romanowsky:Barbara J. Bain; Células Sanguíneas - 5ª Edição: Um Guia Prático; Artmed Editora, 2016 - pg 12
Componente celularCorCromatina incluindo os corpúsculos de Howell-JollyPúrpuraGrânulos promielocíticos e bastões de AuerVermelho-purpúreoCitoplasma dos linfócitosAzulCitoplasma dos monócitosAzul-acinzentadoCitoplasma rico em RNA (i.e., citoplasma basófilo)Azul-escuroCorpúsculos de DöhleAzul-acinzentadoGrânulos específicos dos neutrófilos, grânulos dos linfócitos, granulômero das plaquetasPúrpura-claro ou cor-de-rosaGrânulos específicos dos basófilosPúrpura-escuroGrânulos específicos dos eosinófilosLaranjaEritrócitosCor-de-rosa
Método de coloração dos espécimes
Etapa de fixação: a preparação a ser corada deverá ser previamente fixada, sendo o fixador rotineiramente mais usado em hematologia, o metanol, que deve ser aplicado sobre a lâmina um período de tempo de 1 a 3 minutos. Aplicação do corante: a solução de corante, preparada em solução alcoólica, é aplicado em gotas sobre a lâmina, pelo mesmo período de tempo em que foi realizada a fixação. Coloração propriamente dita: adicionando-se água tamponada (chamada no meio de "água de coloração"), a pH 7, ou água destilada, recentemente fervida, sobre o corante, o que ioniza os sais contidos na solução. Lavagem do espécime: após a coloração, as lâminas são lavadas sob jato de água corrente e em seguida procede-se a uma secagem ao ar.
Uma formulação de água tamporada ("água de coloração"), com pH regulado a 7,0 é: Fosfato diácido de potássio (fosfato monopotássico, KH2PO4) 1 grama Fosfato monoácido de sódio (fosfato dissódico, Na2HPO4) 3 gramas Água destilada 1000 mL.
Comportamentos em determinadas aplicações
É observado que a heparina frequentemente provoca alterações de nuances de coloração quando da aplicação da solução corante de Romanowsky, promovendo a formação de halos róseos em volta dos leucócitos somando causar aglutinação de heterófilos, tendo como consequência um aumento do espalhamento da população destas células, quando comparados com a homogeineidade das mesmas se em meio contendo citrato.CAROLINE FAGUNDES TARCITANO; Hemograma de Calopsitas (Nymphicus hollandicus) Criadas no Estado do Rio de Janeiro; Dissertação submetida como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Ciências, no Curso de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Área de Concentração em Patologia Animal. UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO, INSTITUTO DE VETERINÁRIA; Seropédica, RJ, 2010.GREEN-R.BLUE Mc LENDON, A. ratite hematology (1201-1206 p). In: FELDMAN, B.F. ; ZINK, J.G. & JAIN, N.C. Schalm´s Veterinary Hematology. 5 nd Ed. Philadelphia:Lippincot Willians, 2000,1344 p.
Pode ser usado assim como o corante panótico rápido, em citologia de células presentes no escarro.Jéssica Gonçalves, et al; Confiabilidade da coloração hematológica rápida para citologia de escarro; J. bras. pneumol. vol.40 no.3; São Paulo, May/June, 2014.
A coloração de Romanowsky encontra aplicação no diagnóstico citopatológico de lesões da tiróide,Willian Rebouças Schmitt; PUNÇÃO ASPIRATIVA POR AGULHA FINA E A SUA IMPORTÂNCIA DIAGNÓSTICA NAS LESÕES DA TIRÓIDE; Instituto de CIências Médicas Abel Salazar - Universidade do Porto; Porto, 2011.Sudha R. Kini; Thyroid Cytopathology: An Atlas and Text; Lippincott Williams & Wilkins, 2008. - pg 11 e mastócitos em mastocitomas de mamíferos como cães, por exemplo.Raquel Rubia Rech; MASTÓCITOS EM CONDIÇÕES NORMAIS E PATOLÓGICAS COM ÊNFASE EM MASTOCITOMAS DE CÃES ; UFSM Dissertação de Mestrado; Santa Maria, RS, Brasil 2003.
É utilizado na citologia de células-tronco de medula óssea,Anna Paula Balesdent Barreira, Daniela Tendler Leibel Bacellar, Rosemberg Gomes Kiffer* Ana Liz Garcia Alves; Punção aspirativa de medula óssea em eqüinos adultos para obtenção de células-tronco ; R. bras. Ci. Vet., v. 15, n. 1, p. 56-59, jan./abr. 2008. Outra fonte PDF: www.abraveq.com.br e no hemograma de mamíferos como equinos,HELENA ISABEL SOARES BORGES E SILVA; CONTRIBUIÇÃO PARA O ESTUDO DO HEMOGRAMA DO CAVALO PURO SANGUE LUSITANO; Dissertação apresentada para a obtenção do Grau de Mestre em Medicina Veterinária no Curso de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária conferido pela Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias. Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias Faculdade de Medicina Veterinária Lisboa 2011.Rick L. Cowell,Ronald D. Tyler; Diagnostic Cytology and Hematology of the Horse; Elsevier Health Sciences, 2001. pg 8 assim como eritograma e leucograma de aves como a ema.EUNICE ANITA DE MOURA FORTES; MORFOLOGIA, ERITROGRAMA E LEUCOGRAMA DO SANGUE PERIFÉRICO DE EMA (Rhea americana, Linnaeus, 1758); Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação do Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Piauí; TERESINA, Estado do Piauí - Brasil, novembro - 2004.
Permite a contagem de leucócitos em répteis, como quelônios,REGINA MAMEDE COSTA; RESPOSTA HUMORAL E CINÉTICA LEUCOCITÁRIA DE TRACAJÁS (PODOCNEMIS UNIFILIS (TROSCHEL, 1848)) INOCULADAS EXPERIMENTALMENTE COM ESCHERICHIA COLI; UVV – CENTRO UNIVERSITÁRIO VILA VELHA - PROGRAMA DE MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL; VILA VELHA – ESPÍRITO SANTO, Março de 2011. assim como em peixes.Fernanda Maria Carvalho SOUSA, Airton Mendes CONDE JÚNIOR, Heliana de Barros FERNANDES, Evelin Nildiane da Silva EDLIN, Eunice Anita de Moura FORTES; MORFOLOGIA DAS CÉLULAS SANGUÍNEAS DE MANDI (PIMELODUS MACULATUS, LACÉPÈDE, 1803); REVISTA CIENTÍFICA DE MEDICINA VETERINÁRIA-ISSN:1679-7353, Ano XII-Número 23 – Julho de 2014 – Periódico Semestral
Visando a caracterização e contagem dos leucócitos, por processamento de imagens, a partir de alterações, desenvolve-se corantes de fase única que coram diferenciadamente os leucócitos em meio líquido.V. A. O. Nascimento, T. F. Moraes, H. J. Q. Oliveira; COLORAÇÃO DE LEUCÓCITOS EM MEIO LÍQUIDO PARA AQUISIÇÃO E DIFERENCIAÇÃO POR PROCESSAMENTO DE IMAGENS; XXIV Congresso Brasileiro de Engenharia Biomédica – CBEB 2014.
Os corantes de Romanowsky, mesmo sendo amplamente empregados na rotina laboratorial para a coloração de extensões sanguíneas (esfregaços), evidenciam os reticulócitos apenas através de leve basofilia, não permitindo a sua quantificação de forma precisa.MACKELLY SIMIONATTO; ESTUDO COMPARATIVO DE MÉTODOS DE CONTAGEM DE RETICULÓCITOS PARA CONTROLE DE QUALIDADE; Dissertação apresentada como requisito parcial à obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal do Paraná; CURITIBA, 2009.
Ver também Testes de detecção de antigenos de malaria Coloração
Ligações externas Diagnosis and Treatment of Malaria CDC website on malaria diagnosis and treatment Field stain Staining methods for the identification of malaria parasites Laboratory Diagnosis of Malaria This Royal Perth Hospital (Australia) website provides an excellent overview of malaria diagnostics UK malaria advisory, diagnostic and reference service for malaria The Malaria Reference Laboratory of the Public Health Laboratory Service in the UK Chenzinsky and Romanowsky(Russian)(English) On the 120th Anniversary of the Discovery of the Romanowsky Effect
Categoria:Anatomia patológica