Рекомбиназная полимеразная амплификация (, RPA) представляет собой альтернативу полимеразной цепной реакции. В зависимости от размера ампликонов, количества копий и типа образца, технология RPA обеспечивает умножение генетического материала за 5—40 минут, а сама реакция осуществляется в изотермических условиях. При добавлении обратной транскриптазы к реакционной смеси посредством RPA возможно определять РНК, так же как и ДНК, без необходимости в отдельной процедуре получения кДНК. Поскольку реакция изотермическая, для неё можно использовать более дешевое и простое оборудования, по сравнению с ПЦРLiu, L., Wang, J., Geng, Y., Wang, J., Li, R., Shi, R., & Yuan, W. (2018). Equipment-free recombinase polymerase amplification assay using body heat for visual and rapid point-of-need detection of canine parvovirus 2. Molecular and cellular probes, 39, 41-46. Qin, Z., Xue, L., Cai, W., Gao, J., Jiang, Y., Yang, J., ... & Wu, Q. (2021). Development of a recombinase-aided amplification assay for rapid detection of human norovirus GII. 4. BMC Infectious Diseases, 21(1), 1-8. Zhang, W., Feng, Y., Zhao, H., Yan, C., Feng, J., Gan, L., ... & Yuan, J. (2021). A Recombinase Aided Amplification Assay for Rapid Detection of the Klebsiella pneumoniae Carbapenemase Gene and Its Characteristics in Klebsiella pneumoniae. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 869. Feng, Y., Xue, G., Feng, J., Yan, C., Cui, J., Gan, L., ... & Yuan, J. (2021). Rapid Detection of New Delhi Metallo-β-Lactamase Gene Using Recombinase-Aided Amplification Directly on Clinical Samples From Children. Frontiers in microbiology, 2087. Li, F., He, P., Xiong, D., Lou, Y., Pu, Q., Zhang, H., ... & Yu, J. (2021). A Reverse Transcription Recombinase-Aided Amplification Method for Rapid and Point-of-Care Detection of SARS-CoV-2, including Variants. Viruses, 13(9), 1875. . Оптимальный диапазон температур 37−42 °С, но реакция идёт с небольшой скоростью и при комнатной температуре. Подобное преимущество делает RPA превосходным кандидатом для разработки недорогих, быстрых, «полевых» молекулярных диагностических тестов. Методика RPA разработана биотехнологической компанией TwistDX LTD, находящейся в Кембридже, Великобритания.
Примечания
Категория:Методы молекулярной биологии