Окраска гематоксилином и эозином (окраска гематоксилин-эозином) — один из самых распространённых методов окраски в гистологии. Широко используется в медицинской диагностике, в частности в онкологии для окраски удаленной или полученной при биопсии ткани.
Окраска включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.
Техника окраски гематоксилин-эозином Удаляют парафин из срезов в орто-ксилоле или толуоле, проводят по спиртам нисходящей концентрации и доводят до воды (две порции ксилола или толуола — 3-5 минут, 96° этанол — 3 минуты, 80° этанол — 3 минуты, 70° этанол — 3 минуты, дистиллированная вода — 5 минут). Окрашивают гематоксилином 7-10 минут (в зависимости от зрелости красителя). Промывают в дистиллированной воде — 5 минут. Дифференцируют в 1 % соляной кислоты на 70° этаноле до побурения срезов. Промывают дистиллированной водой, а затем слабым (0,5 %) раствором аммиака до посинения срезов. Окрашивают водным раствором эозина 0,5-1 минуту (в зависимости от желаемой окраски). Промывают в трех порциях дистиллированной воды для удаления избытка эозина. Удаляют воду из срезов в одной порции 70° этанола, двух порциях 96° этанола. Экспозиция в каждой порции спирта — 2 минуты. Просветляют срезы в двух порциях карбол-ксилола (смесь расплавленного фенола и ксилола либо толуола в соотношении 1:4 или 1:5) — 1 минута. Производят окончательное обезвоживание срезов в двух порциях ксилола или толуола. Пребывание срезов 2 минуты. Заключают срезы в канадский бальзам или синтетическую среду для заключения гистологических срезов.
Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило, гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином, остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.
См. также Краситель Романовского — Райта
Ссылки SIGMA-ALDRICH H&H Informational Primer Routine Mayer’s Hematoxylin and Eosin Stain (H&E) Hematoxylin & Eosin (H&E) Staining Protocol Rosen Lab, Department of Molecular and Cellular Biology, Baylor College of Medicine) Step by step protocol
Категория:Окрашивание микроскопических препаратов Категория:Красители для микроскопии