náhľad|287x287bod|Aktivácia génov pomocou FLP rekombinázy v C. elegans: Transgénny kmeň nesúci FLP indukovateľnú expresiu tetanového toxínu pred a po tepelnom šoku. Na porovnanie je zobrazený mutant unc-25, ktorému chýba syntéza GABA. Rekombináza je enzým, ktorý má kruciálny význam v konzervatívnej miestne špecifickej rekombinácii, pretože umožňuje špecifické vystrihnutie a špecifické prilepenie mobilného genetického elementu v priebehu konzervatívnej miestne špecifickej rekombinácie. Rekombináza je užitočný nástroj pre bunkových biológov a vývinových biológov, pretože umožňuje študovať priestorovú (tkanivovo špecifickú) a časovú (v rôznych fázach vývinu) reguláciu génov a ich význam.
Do organizmu červov, drozofíl, myší sa dá vpraviť gén pre rekombinázu a dizajnovaná cieľová molekula DNA, ktorá bude touto rekombinázou rozpoznávaná. Gén kódujúci rekombinázu je vo vhodnom čase aktivovaný, čím sa vyexprimuje rekombináza, ktorá v danej bunke vyvolá konzervatívnu miestne špecifickú rekombináciu rozpoznávaného génu, ktorý sa týmto najčastejšie poruší.
Technika využívajúca rekombinázu sa využíva aj na štúdium vývoja myší a to tak, že sa do buniek zárodočnej línie vložia dve molekuly DNA:
jedna bude niesť gén pre rekombinázu (napr. Cre rekombinázu z bakteriofága P1), ktorý bude pod kontrolou promótora, ktorý je tkanivovo špecifický a vyvoláva expresiu rekombinázového génu, zatiaľčo iné promotory v iných tkanivách túto expresiu nevyvolajú, druhá bude niesť gén záujmu, ktorý bude obklopený DNA sekvenciami, ktoré bude rozpoznávať rekombináza: napr. LoxP sekvencie. Rekombináza vyvolá konzervatívnu miestne špecifickú rekombináciu a daný gén sa tým poškodí, čím sa zistí jeho úloha v tkanive, v ktorom došlo ku aktivácii génu pre rekombinázu.
Je známe veľké množstvo tkanivovo špecifických promótorov, pričom mnohé z nich sú aktívne iba v určitom krátkom časovom úseku vývinu organizmu, preto je možné touto technikou skúmať aj význam génov vo vývine v danom tkanive.
Referencie
Pozri aj
konzervatívna miestne špecifická rekombinácia mobilný genetický element promotor genetické inžinierstvo ontogenéza vývinová biológia bunková biológia
Kategória:Molekulárna biológia