Przeciwnikami, z którymi musi najczęściej walczyć gracz, są szkielety i nietoperze. Spotkać także można bossów, takich jak gigantyczny szkielet, czy inne duże stworzenia. Niektóre szkielety są uzbrojone w miecze, inne w łuki i strzały, część z nich może pluć ogniem lub posiada tarcze. Szkielety są zdolne do wspinania się po ścianach i pokonywania przeszkód. Pozostałymi niebezpieczeństwami są lawa, żrący kwas, spadające stalaktyty, kule ognia, ostre wahadła i inne pułapki.
Do uzyskania interakcji fizycznych między postaciami a obiektami w Trine użyto silnika fizyki PhysX firmy Nvidia.
Postacie 250px|mały|Złodziejka Zoya na poziomie leśnym.
Złodziejka Złodziejka Zoya mówi głosem Vicky Krueger. Jej bronią jest łuk. Przytrzymanie przycisku strzału powoduje mocniejsze naprężenie cięciwy, dzięki czemu strzała leci dalej i bardziej prosto. Złodziejka posiada także linę z hakiem, która po wystrzeleniu przyczepia się do drewnianych powierzchni. Używanie normalnych strzał i liny jest nielimitowane i nie wyczerpuje energii. Podczas gry złodziejka zyskuje zdolność używania płonących strzał, które zużywają jej energię.