thumb|350px|Variaciones del llargor del apanfilo VNTR en seis individuos. La buelga xenética (tamién llamada prueba d'ADN o analís d'ADN) ye una téunica que s'utiliza pa estremar ente los individuos d'una mesma especie utilizando muestres de la so ADN. La so invención deber al doctor Alec Jeffreys, de la Universidá de Leicester, quien dio a conocer la so nueva téunica en 1984. La primer resultáu práutica en medicina forense sirvió pa condergar a Colin Pitchfork polos asesinatos de Narborough en 1983 y de Enderby en 1986.Colin Pitchfork — first murder conviction on DNA evidence also clears the prime suspect Forensic Science Service Accessed 23 Dec 2006
La téunica basar en que dos seres humanos tienen una gran parte de la so secuencia d'ADN de mancomún y p'estremar a dos individuos puede esplotase la repetición de secuencies altamente variables llamaes minisatelites o VNTR. Dos seres humanos ensin rellacionar va ser pocu probable que tengan el mesmu númberu de minisatélites nun determináu locus. Nel SSR/STR de perfiles (que ye distintu de calquier xenéticu) la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizar pa llograr abondu ADN que dexe detectar el númberu de repeticiones en dellos loci. Ye posible establecer una seleición que ye bien pocu probable que surdiera por casualidá, sacante nel casu de ximielgos idénticos, que van tener idénticos perfiles xenéticos.
La buelga xenética utilizar na medicina forense pa identificar a los sospechosos con muestres de sangre, pelo, cuspia o semen. Tamién dio llugar a delles exoneraciones de condergaos. Igualmente utilízase n'aplicaciones como la identificación de los restos humanos, les pruebes de paternidá, la compatibilidá na donación d'órganos, l'estudiu de les poblaciones d'animales monteses, y l'establecimientu del orixe o la composición d'alimentos. Tamién s'utilizó pa xenerar hipótesis sobre les migraciones de los seres humanos na prehistoria.
Los microsatélites amuesen una mayor variación que'l restu del xenoma yá que nellos atopen unes secuencies en distinta repetición y con distintu grau de recombinación por cuenta de la inestabilidá del locus.
Muestres de referencia
Pa la identificación del ADN tien de realizase una estracción d'ADN que puede venir de muestres tales como: Artículos personales (por casu cepiyu de dientes, máquina d'afaitar). Bancu de muestres (como un bancu de semen o la biopsia d'un texíu). Parientes. Restos humanos primero identificaos.
Delles muestres de referencia recoyer con un hisopu bucal.
Téuniques d'identificación de la "buelga xenética" Estes variaciones pueden detectase coles siguientes téuniques:
Analís de RFLP
L'analís consiste en faer un ensayu Southern (o Southern blot, un métodu que sirve pa verificar si una determinada secuencia d'ADN ta o non presente nuna muestra d'ADN analizada) y usar sondes específiques pa detectar los VNTR (númberu variable de repeticiones en tándem).
En primer llugar l'ADN que se va a analizar dixebrar d'otros materiales. De siguío, tien de cortase en fragmentos de distintos tamaños usando enzimes de restricción, que son proteínes que corten l'ADN ensin estropiar les bases. Los fragmentos ordenar por tamañu emplegando la electroforesis en xel. L'ADN, que tien carga negativa, avanza nel campu llétricu. Les molécules más pequeñes muévense más rápido al traviés del xel, polo que se van alcontrar más alloñaes del orixe que los fragmentos más grandes. Depués por calor o solución alcalina, aplícase xel col fin de desnaturalizar l'ADN y dixébrase en fragmentos individuales. Una vegada realizáu esto l'ADN esta agora llistu pa ser analizaos utilizando una sonda radiactiva de reacción d'hibridación.
Pa faer la sonda radiactiva, precísase la polimerasa del ADN. L'ADN que se va someter a la radioactividá asitiar nun tubu d'ensayu. De siguío amiéstase la polimerasa nel tubu. Eslleir y espérase a qu'empiece a funcionar. Como los parches de polimerasa d'ADN ruempen l'ADN, los actuales son sustituyíos polos nuevos nucleótidos nel tubu. Cada vez que la muestra tenga una base guanina, la citosina va ser puestu en radioactividá. Na repetición del ADN, la polimerasa tamién se vuelve radioactiva. Les pieces radioactives tán llistes pal so usu. Agora la sonda radioactiva pue ser usada pa crear una reacción d'hibridación. La hibridación asocede cuando dos secuencies xenétiques xúnense pola mor del hidróxenu que s'atopa nos pares de les bases. Hai dos d'estos ente adenina (A) o timina (T) y trés de citosina (C) o guanina (G). Pa realizar la hibridación l'ADN tien que tar desnaturalizado.
L'ADN desnaturalizado radioactivu y la sonda tienen de ser puestos nuna bolsa de plásticu con líquidu salino y selláu fuertemente. La sonda va xuntar a la desnaturalización d'ADN uquier que s'atope de forma apropiada. La sonda y l'ADN nun tienen qu'encaxar de forma exacta. Esti procesu termina faciendo un patrón d'ADN de les buelgues dixitales. Toa persona tien un VNTR qu'heredó d'unu de los sos padres y los VNTR son únicos pa cada persona.
Analís por PCR
Consiste en aplicár la téunica de PCR p'amplificar rexones específiques colos cebadores fayadizos. Cola invención de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) la teunoloxía xenética tuvo una importante meyora na capacidá de recuperación d'información a partir de muestres bien pequeñes. PCR consiste na amplificación de rexones específiques d'ADN usando temperatura y una enzima polimerasa termoestable xunto con fluorescencia etiquetada nuna secuencia específica del ADN. Esisten kits comerciales qu'utilicen polimorfismos de nucleotidu únicu (SNP) de discriminación disponible, estos kits d'usu de PCR usaos p'amplificar rexones específiques con variaciones conocíes ya hibridación con sondes de fondiáu en tarxetes, lo que resulta nuna mancha de color correspondiente a una orde en particular.
Les principales crítiques al métodu RFLP inciden na so lentitú y nes grandes cantidaes d'ADN que requier pa llograr resultaos útiles. Esto llevó a métodos basaos en PCR que requiern menores cantidaes d'ADN que pueden ser tamién más degradaos que los utilizaos n'analises de RFLP.
Los ensayos de PCR son desaxeradamente pervalibles pa identificár nuevos miembros d'una familia xénica.
AmpFLP
Trátase d'una téunica d'amplificación de rexones polimórficas (con munchos polimorfismos ), preferiblemente el locus D1S80. Esti analís pueden ser automatizado, y dexa la fácil creación d'árboles filoxenéticos basaos na comparanza de les muestres individuales d'ADN.
Basáu nel númberu variable de repeticiones en tándem (VTNR) pa estremar diversos polimorfismos alelos, que son dixebraos nun xel de poliacrilamida utilizáu nuna escalera alélica (n'oposición a un pesu molecular). Bandes podríen ser visualizaos por tincíon de xel de plata. Un llugar popular para tomar de buelgues dactilares ye'l locus D1S80. Al igual que los métodos basaos en PCR, l'ADN degradáu o en cantidaes bien pequeñes d'ADN puede causar alélica d'abandonu.
Por cuenta del so costu relativamente baxu y la facilidá pa la so puesta en marcha y operación, AmpFLP sigue siendo popular nos países de baxos ingresos.
Analís STR (Short Tandem Repeat):en:Short tandem repeat
Consiste na amplificación de secuencies con pequeñes repeticiones en tándem que nun se caltienen dientro de la especie. Una vegada amplificaes dixébrense los fragmentos pa comprobar el númberu de repeticiones (por aciu electroforesis capilar o en xel), de forma que pueden estremase patrones de repeticiones que pueden ser comparables y asociables.
Esti métodu usa rexones altamente polimórficas que tienen secuencies curties repitíes d'ADN (el más común ye de 4 bases repitíes, pero hai otros llargores n'usu, incluyendo bases 3 y 5). Porque distintes persones tienen distintos númberos d'unidaes de repetición y estes rexones de la DNA puede utilizase pa estremar ente les persones. Estos STR loci (llugares) son atacaos con primers específicos de secuencia y amplifíquense por aciu PCR. Los fragmentos d'ADN que son resultáu entós detectaos y separaos por aciu electroforesis. Esisten dos métodos de separación y detección, la electroforesis capilar (CE) y la electroforesis en xel.
Los polimorfismos STR amosaos en cada rexón son de por sí bien comunes, polo xeneral, cada polimorfismu ye compartida per alredor d'un 5 - 20% de les persones. Cuando reparamos múltiples loci, ye la única combinación d'estos polimorfismos d'un individuu que fai qu'esti métodu de discriminación seya un preséu d'identificación. Les rexones STR que se ponen a prueba nuna persona convertir nuna discriminación de la prueba.
D'un país a otru esisten distintos sistemes STR nel analís d'ADN que tán n'usu. N'América del Norte los sistemes qu'amplifiquen el CODIS 13 loci nucleu son cuasi universal, ente que nel Reinu Xuníu, el sistema de SGM +, que ye compatible cola base de datos nacional d'ADN esta n'usu. Sía'l que quier el sistema utilizáu, munches de les rexones STR usaes na prueba son los mesmes. Estos sistemes d'analises d'ADN básense alredor de les reacciones múltiplex, que munches rexones STR va ser sometíu a prueba nel mesmu tiempu.
thumb|350px|Estructura del ADN.
La electroforesis capilar (movimientu por aciu l'aplicación d'un campu llétricu), dexa la inyeición de fragmentos d'ADN nun tubu de vidriu delgáu (capilar) llena de polímeros. L'ADN ye estrayíu al traviés del tubu pola aplicación d'un campu llétricu, la separación de los fragmentos asocede de tal manera que los más pequeños fragmentos de viaxen más rápidu al traviés de los capilares. Los fragmentos son entós detectaos utilizando colorantes fluorescentes que s'axunta a los primers utilizaos na PCR. Esto dexa que múltiples fragmentos amplificaos executar de manera simultánea, daqué conocíu como multiplexación. Depués asígnense talles utilizando'l tamañu del ADN como normes d'etiquetáu que s'añader a cada muestra, y el númberu de repeticiones determinar comparando'l tamañu de la escalera alélica, que contién una muestra de tolos tamaños comunes de les posible repeticiones. Anque esti métodu ye costosu, con mayor capacidá de les máquines y un mayor rendimientu de les que se tán utilizando p'amenorgar el costu/muestra ye posible amenorgar los retrasos qu'esisten en munches instalaciones de la delincuencia gobierno.
Electroforesis en xel ye unu de los actos que ye utilizáu usando principios similares conocíos como "CE", pero en llugar d'utilizar un capilar, el gran xel de poliacrilamida utilizar pa dixebrar los fragmentos d'ADN. Un campu llétricu ye aplicáu, como na CE, pero en llugar de correr toles muestres por un detector, los fragmentos más pequeños execútense cerca de la parte inferior del xel y tol xel ye escaniáu y guardáu nun ordenador. Esto produz una imaxe que muestra tolos de les bandes correspondientes a distintos tamaños y repite la escalera alélica. Esti métodu nun riquir l'usu de les normes de tamañu, una y bones la escalera alélica execútase xunto coles muestres y sirve pa esti propósitu. La visualización puede ser al traviés del usu de marcaos tintes fluorescentes primers na tinción de plata o pol xel antes d'escaniar. A pesar de que ye rentable y puede ser de bastante altu rendimientu, p'aplicar la tinción de plata ITS suspéndese. Amás, munchos llaboratorios tán eliminación gradualmente xeles a favor de la CE, faciendo'l costu de les máquines fáigase más afechisca.