Koaktozinoliki protein (COTL1 ili CLP) je protein koji je kod ljudi kodiran genom COTL1.
Opis Aktinski citoskelet regulišu brojni proteini koji vežu aktine, uključujući koaktozin, protein koji je prvi put identificiran u kalupu sluzi. CLP stupa u interakciju s 5-lipoksigenazom (5LO, ili ALOX5), proteinom od 78 kD koji se eksprimira u različitim tipovima leukocita, uključujući dendritske ćelije, jer je prvi enzim u biosintezi leukotriena (Provost et al., 1999).
Aminokiselinska sekvenca Dužina polipeptidnog lanca je 142 aminokiseline, a molekulska težina 15.945 Da. 1020304050 MATKIDKEACRAAYNLVRDDGSAVIWVTFKYDGSTIVPGEQGAEYQHFIQ QCTDDVRLFAFVRFTTGDAMSKRSKFALITWIGENVSGLQRAKTGTDKTL VKEVVQNFAKEFVISDRKELEEDFIKSELKKAGGANYDAQTE Simboli
C: Cistein D: Asparaginska kiselina E: Glutaminska kiselina F: Fenilalanin G: Glicin H: Histidin I: Izoleucin K: Lizin L: Leucin M: Metionin N: Asparagin P: Prolin Q: Glutamin R: Arginin S: Serin T: Treonin V: Valin W: Triptofan Y: Tirozin
Funkcija Ovaj gen kodira jedan od brojnih proteina koji vežu aktine za reguliranje aktinskog citoskeleta. Nastali protein veže F-aktin, a također djeluje i u stabiliziranju 5-lipoksigenaza (ALOX5). Iako je zabilježeno da se ovaj gen mapira na hromosomu 17 u regiji Smith–Magenisinog sindroma, najbolje poravnanje mu je na hromosomu 16. U regiji Smith–Magenisinog sindroma dva su srodna pseudogena.
Dvohibridnom analizom kvasca, Provost et al. (2001) pokazali su da CLP stupa u interakciju s F-aktinom, a samo privremeno u interakciju s monomernim G-aktinom. Imunofluorescentna mikroskopija pokazala je kolokalizaciju CLP-a sa stresnim vlaknima F-aktina, neovisno o kalciju. Analiza mutacije utvrdila je da je lys75, ali ne lys130 i lys131, presudan za CLP interakciju s aktinom. Pokazali su da je Lys131 odgovoran za vezanje CLP-a na 5LO.Provost, P., Doucet, J., Hammarberg, T., Gerisch, G., Samuelsson, B., Radmark, O. 5-lipoxygenase interacts with coactosin-like protein. J. Biol. Chem. 276: 16520-16527, 2001. [PubMed]: 11297527
Doucet et al. (2002) našli su da mišji Clp veže 5LO pri visokim koncentracijama soli i F-aktin pri niskim koncentracijama soli na pH osjetljivom i neovisnom o kalciju. 1. Koristeći HPLC analizu, Rakonjac et al. (2006) dokazali su da CLP može poslužiti kao skela za aktivnost 5LO izazvanu Ca (2 +), slično membranama. U prisustvu fosfatidilholina (membrane), CLP je indukovao povećano stvaranje LTA4 za 5LO. CLP je takođe povećao odnos 5-HETE i 5-HPETE. Analiza mutacije pokazala je da su za ove efekte potrebni trp13, trp75 i trp102 u petljama vezanja liganda u beta 5LO sendviču. Western blot analiza pokazala je da je stimulacija polimorfojedarnih ćelija sa Ca (2+) ionoforom izazvala translokaciju CLP i 5LO iz citosola u ćelijsko jedro. Zaključili su da je CLP relevantan za stvaranje 5LO proizvoda, kao što je 5-HETE, u citosolu različitih tipova ćelija i djelujući u kompleksu zajedno s 5LO i membranama povećava kapacitet 5LO za biosintezu leukotriena.Rakonjac, M., Fischer, L., Provost, P., Werz, O., Steinhilber, D., Samuelsson, B., Radmark, O. Coactosin-like protein supports 5-lipoxygenase enzyme activity and up-regulates leukotriene A(4) production. Proc. Nat. Acad. Sci. 103: 13150-13155, 2006. [PubMed]: 16924104.
Kloniranje i ekspresija Analizom kozmida iz regije uz bok sekvence za Smith–Magenisin sindrom (SMS), delecije na hromosomu 17, praćena ispitivanjem biblioteke cDNK posteljica, Chen et al. (1997) dobili su cDNK koja kodira CLP. Izvedeni protein sa 142 aminokiseline je 75% sličan koaktozinu. Northern blot analizom otkriven je transkript od 2,0 kb u placenti, jetri, plućima i bubrezima. Koristeći 2-hibridni zaslon kvasca plućne cDNK biblioteke s 5LO kao sondom, Provost et al. (1999) izolirali su cDNK koje kodiraju CLP. Analiza imunoblota pokazala je ekspresiju proteina od 16 kD, u skladu sa predviđenom veličinom.Provost, P., Doucet, J., Stock, A., Gerisch, G., Samuelsson, B., Radmark, O. Coactosin-like protein, a human F-actin-binding protein: critical role of lysine-75. Biochem. J. 359: 255-263, 2001. PubMed: 11583571 Doucet et al. (2002) klonirani mišji Clp, koji je 95% identičan ljudskom CLP.
Analizom Northern blot-a, Provost et al. (2001) pokazali su da se transkript CLP od 2,0 kb pretežno eksprimira u placenti, plućima i bubrezima, a sa nižim nivoima u mozgu, jetri i gušterači. U srcu otkrili su dodatni opseg od 1,4 kb. U imunskim tkivima, najveća ekspresija CLP bila je u leukocitima periferne krvi, sa nižim nivoima u slezeni i limfnim čvorovima. Western blot analizom otkrivena je ekspresija CLP u nejedarnoj frakciji neutrofila.Doucet, J., Provost, P., Samuelsson, B., Radmark, O. Molecular cloning and functional characterization of mouse coactosin-like protein. Biochem. Biophys. Res. Commun. 290: 783-789, 2002. [PubMed]: 11785969
Mapiranje Chen et al. (1997) lokalizirali su CLP gen na svakom kraju regije za deleciju SMS-a na hromosomu 17p11.2, hibridnim zračenjem i Southern blot analizama. Primijetili su homologne sekvence na hromosomima 15, 16 i Y.Chen, K.-S., Manian, P., Koeuth, T., Potocki, L., Zhao, Q., Chinault, A. C., Lee, C. C., Lupski, J. R. Homologous recombination of a flanking repeat gene cluster is a mechanism for a common contiguous gene deletion syndrome. Nature Genet. 17: 154-163, 1997. PubMed: 9326934
Međutim, Gross (2011) mapirao je gen COTL1 ns hromosomu 16, regija 16q24.1, na temelu poravnavanja sekvence COTL1 (GenBank BC010039) sa genomskom sekvencom (GRCh37).
Interakcije
Pokazano je da COTL1 komunicira s ALOX5. ALOX5 je prvi enzim u metabolizmu arahidonske kiseline do niza biološki važnih ćelijskih sisnalizacijskih sredstava: a) proupalni medijator, leukotrien B4 (LTB4); b) ograničivači dišnih puteva, LTC4, LTD4 i LTE4; c) porodica 5-hidroksieikosatetraenojskih kiselina, medijatora proupalnih i proalergijskih reakcija, 5-HETE i 5-oksoeikozatetraenojska kiselina.
ALOX5 takođe doprinosi metabolizmu arahidonske kiseline i drugih polinezasićenih masnih kiselina u agense koji blokiraju upale i alergijske reakcije, specijalizirani posrednici za razrješavanje lipoksina i resovinske potklase. Na osnovu studija in vitro, COTL1 služi za stabilizaciju ALOX5, djelujući kao šaperon ili skela, kako bi spriječio inaktivaciju enzima i time promovirao njegovu metaboličku aktivnost.
Reference
Dopunska literatura
Vanjski linkovi
Kategorija:Geni na hromosomu 16 Kategorija:Ljudski proteini Kategorija:Proteomika