Posiadał już wtedy szerokie wykształcenie protestanckie oraz humanistyczne.
Życie i praca w Anglii Florio postawił sobie za cel nauczenie manier protestanckich arystokratów angielskich, których uważał za nieokrzesanych i niecywilizowanych, a także pomoc im w zdobywaniu umiejętności lingwistycznych. W związku z tym wprowadził do języka angielskiego liczne włoskie przysłowia oraz wiele nowych słów.
Podczas pracy jako nauczyciel i szpieg (dla organizacji szpiegowskiej królowej Elżbiety) w domu francuskiego ambasadora, Florio zaprzyjaźnił się z Giordano Bruno, którego teorie tłumaczył na język angielski podczas przyjęć. Głównie na podstawie dzieł Bruno napisał też słownik włosko-angielski A Worlde of Wordes (1598). Przez jakiś czas mieszkał i studiował w Oksfordzie. Około roku 1576 otrzymał posadę nauczyciela syna Richarda Barnesa, biskupa Durham.
W roku 1578 wydana została książka Florio pod tytułem First Fruits, which yield Familiar Speech, Merry Proverbs, Witty Sentences, and Golden Sayings. Trzy lata później Florio został wykładowcą języka francuskiego i włoskiego na Magdalen College w Oksfordzie.