miniaturadaimagem|Neurônios PVH de ratos Long-Evans marcados com o traçador retrógrado fluoro-ouro. O rastreamento retrógrado é uma técnica aplicada nas pesquisas utilizado em neurociência para rastrear conexões neurais desde seu ponto de terminação (a sinapse ) até sua origem (o corpo celular ). As técnicas de rastreamento retrógrado possibilitam uma avaliação detalhada das conexões neuronais entre uma população-alvo de neurônios e suas entradas por todo o sistema nervoso . A vantagem de utilizar essas técnicas é quepermitem o "mapeamento" das conexões entre neurônios em uma estrutura específica, como por exemplo, o olho, e os neurônios-alvo no cérebro . A técnica oposta é o rastreamento anterógrado, que é usado para rastrear conexões neurais desde sua origem até seu ponto de terminação (ou seja, do corpo celular até a sinapse). Ambas as técnicas de rastreamento, anterógrado e retrógrado, baseiam-se na visualização do transporte axonal .
Técnicas O rastreamento retrógrado pode ser realizado de diversos modos, incluindo o uso de cepas virais como marcadores da conectividade de uma célula ao local da injeção. O vírus da pseudorrabia (PRV; cepa Bartha), por exemplo, pode ser usado como um marcador adequado considerando à propensão da infecção a se espalhar a montante por meio de uma via de neurônios sinapticamente conectados, revelando assim a natureza de seu circuito.
Estudos demonstraram que o vírus da raiva é eficaz para este sistema de rastreamento de circuitos devido ao seu baixo nível de prejuizos às células infectadas, à especificidade de infectar apenas neurônios e à estrita limitação da disseminação viral entre neurônios às regiões sinápticas. Esses fatores permitem traçados altamente específicos que podem revelar conexões neuronais individuais em um circuito sem infligir danos físicos às células.
Outra técnica utilizada é a injeção de "microesferas" especiais nos núcleos cerebrais de animais anestesiados. Os animais são mantidos vivos por alguns dias e depois eutanasiados. As células na origem da projeção são visualizadas através de um microscópio de fluorescência invertido.
Um grupo de pesquisadores desenvolveram uma técnica especializada que empregava um vírus da raiva modificado. Esse vírus era capaz de infectar uma única célula e saltar através de uma sinapse; Essa técnica possibilitou aos pesquisadores avaliar a conectividade local dos neurônios.
Vírus da raiva Após ser captado no terminal sináptico ou axônio do neurônio alvo, o vírus da raiva é envelopado em uma vesícula que é transportada em direção ao corpo celular pela dineína axonal. No vírus da raiva selvagem, o vírus continuará a se replicar e se espalhar por todo o sistema nervoso central até infectar sistemicamente todo o cérebro. A deleção do gene que codifica a glicoproteína (proteína G) na raiva limita a disseminação do vírus estritamente às células que foram inicialmente infectadas. A disseminação transsináptica do vírus pode ser limitada à transmissão monossináptica para um neurônio de origem por meio da pseudotipagem da proteína G e da colocação do gene sob controle da Cre . Essa disseminação viral pode ser visualizada por meio de métodos que incluem a adição de um gene fluorescente, como a proteína fluorescente verde, ao cassete viral ou por meio de imuno-histoquímica .
Vírus da pseudorrabia Membro da família herpesviridae, o vírus da pseudorrabia se espalha pelo SNC de forma retrógrada e anterógrada, movimentando-se ao longo do axônio neural para o soma e dendritos na aplicação retrógrada. A deleção de três genes de proteínas de membrana chave na cepa PRV-Bartha da pseudorrabia bloqueia a disseminação anterógrada do vírus e permite manipulações adicionais ao DNA viral, como a fluorescência, possibilitando o rastreamento do circuito retrógrado.
Fluoro-Ouro Fluoro-Gold, ou hidroxistilbamidina, é um traçador retrógrado fluorescente não viral cujo movimento ao longo do axônio e através da árvore dendrítica pode ser visualizado por microscopia de fluorescência ou imuno-histoquímica.
Ver também
traçado anterógrado Via neural Rastreamento neuronal viral
Referências
Categoria:Códigos neurais Categoria:Redes neurais Categoria:Neurociência